人（Human）α-生育酚 （α-Tocopherol）ELISA檢測試劑盒使用說明

中文說明書 UNIONHONEST
酶聯免疫吸附測試 Enzyme Linked Immunosorbent Assay
人 （Human） α-生育酚 （α-Tocopherol） ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用 標本：血清或血漿
試驗原理：

α-Tocopherol試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知α-Tocopherol濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將α-Tocopherol和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中α-Tocopherol的濃度呈比例關系。

試劑盒內容及其配制

試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制
96/48人份酶標板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型
塑料膜板蓋1塊半塊即用型
標準品：800mg/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說明書進行稀稀
空白對照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型
標準品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型
生物素標記的抗α-Tocopherol抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型
親和鏈酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型
洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說明書進行稀釋
底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型
標本稀釋液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型

自備材料
1．蒸餾水。
2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，2．請盡快用水沖洗。
3．實驗中不4．要吃喝、抽煙或使用化妝品。
5．不6．要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

ELISA 檢測試劑盒操作注意事項
1．試劑應按標2．簽說明書儲存，3．使用前恢復4．到室溫。稀稀過后的標5．準品應丟棄，6．不7．可保存。
8．實驗中不9．用的板條應立即放回包裝袋中，10．密封保存，11．以免變質。
12．不13．用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同14．批號的試劑不15．要混用。保質前使用。
16．使用一次性的吸頭以免交叉污染，17．吸取終止液和底物A、B液時，18．避免使用帶金屬部分的加樣器。
19．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
20．洗滌酶標21．板時應充分拍干，22．不23．要將吸水紙直接放入酶標24．反應孔中吸水。
25．底物A應揮發，26．避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，27．避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，28．有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
29．加入試劑的順序應一致，30．以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
31．按照說明書中標32．明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不2、含熱原和內毒素的試管。收集血液后，3、1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
4、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
5、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
6、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，7、取上清液
8、保存------如果樣品不9、立即使用，10、應將其分成小部分-70 ℃保存，11、避免反復12、冷凍。盡可能的不13、要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，14、檢測前先離心或過濾。不15、要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
1．標2．準品：標3．準品的系列稀釋應在實驗時準備，4．不5．能儲存。稀釋前將標6．準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

800 mg/ml（6號標準品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 mg/ml（5號標準品）100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 mg/ml（4號標準品）100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 mg/ml（3號標準品）100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 mg/ml（2號標準品）100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 mg/ml（1號標準品）100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 mg/ml（空白對照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

7．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍8．稀釋。

操作步驟
1．使用前，2．將所有試劑充分混勻。不3．要使液體產生大量的泡沫，4．以免加樣時加入大量的氣泡，5．產生加樣上的誤差。
6．根據待測樣品數量加上標7．準品的數量決定所需的板條數。每個標8．準品和空白孔建議做復9．孔。每個樣品根據自己的數量來定，10．能使用復11．孔的盡量做復12．孔。標13．本用標14．本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。
15．加入稀釋好后的標16．準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標17．記的抗體。蓋上膜板，18．輕輕振蕩混勻，19．37℃溫育1小時。
20．甩去孔內液體，21．每孔加滿洗滌液，22．振蕩30秒，23．甩去洗滌液，24．用吸水紙拍干。重復25．此操作3次。如果用洗板機洗滌，26．洗滌次數增加一次。
27．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，28．輕輕振蕩混勻，29．37℃溫育30分鐘。
30．甩去孔內液體，31．每孔加滿洗滌液，32．振蕩30秒，33．甩去洗滌液，34．用吸水紙拍干。重復35．此操作3次。如果用洗板機洗滌，36．洗滌次數增加一次。
37．每孔加入底物A、B各50ul，38．輕輕振蕩混勻，39．37℃溫育10分鐘。避免光照。
40．取出酶標41．板，42．迅速加入50ul終止液，43．加入終止液后應立即測定結果。
44．在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案

標準品濃度（mg/ml）
A800800樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
B400400樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
C200200樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
D100100樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
E5050樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
F2525樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品

局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

ELISA 檢測試劑盒結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的α-Tocopherol標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的α-Tocopherol含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-800mg/ml

4、敏感度： 1.0 mg/ml